מעבדה בביוטכנולוגיה דו"ח מעבדה – הפקת חלבון רקומביננטי GST, ניקויו והפרדתו.

1 . מטרת המעבדה:
במעבדה זו ביקשנו להפיק חלבון רקומביננטי מחיידקי E.
coli מזן BL-21, המכילים את הפלזמיד pGEX 3x, אליו הוחדר מבעוד מועד הגן האוקריוטי GST, המקודד לאנזים גלוטטיון- S- טרנספראז, המתפקד בנטרול רעלים בתאים אוקריוטים. נטרול הרעל נעשה ע"י צימוד לגלוטטיון (צורתו המחוזרת מהווה את הסובסטראט לאנזים GST), שבסופו של דבר הופך לתוצר מסיס- מתפנה במהירות מהתאים, שהינו פחות רעיל.
החלבון יופק ע"י אינדוקציה לאופרון הלקטוז, כדי שנוכל לגרום לביטויו רק כאשר נרצה בכך: החלבון GST אמנם לא מזיק לחיידק אשר מייצר אותו, אך לעתים מפיקים חלבון בחיידקים, שעלול לעכב את גידולם, או אף להרוג אותם בריכוזים גבוהים- לכן, הגן המבוקש יוחדר תחת בקרה, שתאפשר לנו להשרות את ייצור החלבון רק כשנצטרך. נוכל לגדל כמות גדולה ביותר של חיידקים, ואז בבת- אחת להשרות בהם ייצור של חלבון, כך שגם אם אותו חלבון יהרוג לאחר מכן את החיידק שייצר אותו, אין זה משנה, מכיוון שלא יהיה צורך בגידול נוסף של חיידקים.
לאחר הפקת החלבון, ננקה אותו באמצעות כרומטוגרפיית זיקה בשיטת ה- Batch (במבחנה במקום בקולונה) ונבחן את דרגת ניקויו בשיטת SDS- PAGE. בנוסף, נבצע מעקב וזיהוי של החלבון הרקומביננטי, ע"י שימוש בשיטת Western blot.
2. שיטות וחומרים:
העבודה בפונט 14, ללא ביבליוגרפיה