מעבדה בביוכימיה- שיקוע חלבונים

מוסד לימוד
מקצוע
מילות מפתח ,
שנת הגשה 2009
מספר מקורות 5

תקציר העבודה

תקציר:
בין התאריכים 23-30/4/2009
בוצע ניסוי בנושא הפרדת חלבונים, הניסוי זה התחלק לשני חלקים. חלק I, הפרדת חלבונים בשיטת שיקוע, וחלק II, הפרדת חלבונים בשיטת אלקטרופורזה: חלק I, הפרדת חלבונים בשיטת שיקוע:
בניסוי זה בוצע שיקוע חלבונים ולאחר מכאן נקבע ריכוזם בעזרת עקומות כיול שניבנו על סמך בליעה אורך גל  בשתי שיטות, ביורט ו UV.
          א. שיטת ביורט-  הוכנו מבחנות המכילות ריכוזים שונים של חלבון אלבומין בעל ריכוז ידוע והוסף ריאגנט ביורט, נמדדו הבליעות בכל אחת מהמבחנות בעזרת הספקטרופוטומטר והוכנה עקומת כיול.
בנוסף נמדדו הבליעות של החלבונים מהפלט והנוזל העליון בחלבון הביצה.
באמצעות משוואת עקומת הכיול חושבו הריכוזים של הנעלמים:
ריכוז החלבון בפלט (גלובולריים): ,0.23
mg/ml סה"כ חלבונים גלובולריים בביצה 464
mg.
ריכוז החלבון בנוזל העליון (אלבומינים ) : 2.32
mg/ml, סה"כ חלבונים אלבומינים בביצה 46
mg.
          ב.  U.V- גם בשיתה זו הוכנו מבחנות בעלות ריכוזים שונים של חלבון אלבומין בריכוז ידוע, על סמך הבליע של הספקטרופוטומטר נבנתה עקומת כיול, נמדדה הבליעה של הפלט והנוזל העליון בחלבון הביצה, באמצעות משוואת עקומת הכיול חושבו הריכוזים:
 ריכוז החלבון בפלט (גלובולריים):: 0.4918 mg/ml, סה"כ חלבונים גלובולריים בביצה 98.42 mg.
 ריכוז החלבון בנוזל העליון (אלבומינים ): 12.618 mg/ml, סה"כ חלבונים אלבומינים בביצה
5 23.66 mg. יש פער בין שתי השיטות, נתייחס לכך בדיון.
חלק II, הפרדת חלבונים בשיטת האלקטרופורזה:
בניסוי זה הופרדו חלבונים על סמך מסה מולקולארי.
נלקחו 3 נעלמים ותערובת חלבונים וסמן גודל והורצו במכשיר האלקטרופורזה , בתום הרצה התקבלו בנדים.
הוכנה עקומת כיול מתוך ה- Precision Plus Protein Standards . חושב Rf (ניידות יחסית) לכל בנד והוצב במשוואת עקומת הכיול למציאת (Log(Mw וממנו חישוב Mw ביחידות קילו דלטון (KDa ). בוצעה השוואה בין הספרות לנתונים הניסיוניים ונמצאה סטייה קלה. התוצאות הניסיוניות שקיבלנו היו: אלבומין – 67.27 KDa , גמא-גלובאמין –קיבלנו שני יחידות עבור חלבון זה יחידה אחת במשקל 59.26
KDa ויחידה שנייה  24.41KDaואלפא אמילז- 59.26KDa.
תוכן עניינים:
מבוא: 8
מטרת הניסוי: 8
תאור ציוד: 16
תיאור ביצוע: 17
תוצאות: 19
דיון בתוצאות : 22
מסקנות: 23
המלצות: 24
מינוח: 24
מקורות ספרותיים:
5 נספחים:
5 שאלות הכנה – השקעה חלבונים : 28