תקציר:
המטרה הכללית של ניסוי זה היא להתנסות וליישם את מרבית השיטות בהן משתמשים כיום בביולוגיה מולקולארית והנדסה גנטית. המטרה המרכזית של הניסוי היא  לשבט מקטע של גן המקודד לחלבון GFP לתוך פלסמיד של חיידק שחסר גן זה, כמו כן לוודא שאכן חיידק זה קיבל את הגן. תהליך השיבוט הינו תהליך מורכב אשר מכיל מספר שלבים, כל שלב הינו תת מטרה להשגת המטרה הסופית, שלבי הניסוי:
1.    הפקת DNA פלסמידי וקביעת גודל המחדר שבתוכו- במעבדה התבקשנו להחליט איזה קלון מכיל את המחדר הדרוש, בצענו הפקה של DNA פלסמידי מחיידקי E.coli  בעזרת miniprep kit, לאחר מכאן ביצענו חיתוך של DNA פלסמידי להוצאת מחדר מתוכו ובשלב האחרון בוצע הרצה של החיתוכים בג'ל.
2.    ריאקצית PCR להגברת הגן לשיבוט – מטרת מעבדה זו הייתה שימוש במכשיר ה PCR על מנת לשבט גנים לתוך פלסמיד חיידקי.
3.    ניקוי, הכנת תוצר ה PCR לשיבוט – במעבדה זו בדקנו את קבלת התוצר המבוקש וניקינו אותו מהג'ל.
4.    ליגציה וטרנספורמציה– במעבדה זו חברנו בין הגן המקודד ל GFP אותו הגברנו ב PCR לבין הווקטור . 5.    בדיקת טרנספורמנטים – במעבדה זו בדקנו את הצלחת הליגציה והטרנספורמציה.
6.    במעבדה האחרונה ביצענו הרצנ בג'ל על מנת לזהות מושבות חיוביות.
תוצאות ניסוי היו מוצלחות, התקבלו כ 302 מושבות של חיידקים טרנסגניים, מתוכם התקבלו כ 3
מושבות של חיידקים אשר זוהרים ב UV באור ירוק, כ 44 מושבות בעלות צבע לבן ולא זוהרות ב UV וכ
5 5 מושבות בעלות צבע כחול. על סמך התוצאה של כ 302 מושבות ניתן לומר כי יעילות הטרנספורמציה הייתה יעילה, לדעתנו על מנת שנוכל לקבל אחוז יותר גדול של מושבות בעלות צבע ירוק ב UV ניתן להגדיל את היחס בין המחדר לבין הפלסמיד בשלה הליגציה.
תוכן עניינים:
מבוא. 5
כללי: 5
GFP –  Green Fluorescent Protein: 5
פלסמידים  : 6
חיידקי DH5α: 8
E.coli : 9
הפקת הפלסמיד  : 9
PCR – Polymerase Chain Reaction: 10 אנזימי הרסטריקציה  : 13
ליגציה  : 14
טרנספורמציה : 15
סלקציה  : 15
ג'ל אגרוז : 16
אלקטרופורזה  : 16
תוכנית עבודה ותוצאות :. 18
הפקת DNA פלסמידי וקביעת גודל המחדר : 18
ריאקצית PCR להגברת הגן : 19
ניקוי, הכנת תוצרי ה PCR לשיבוט: 20 ליגציה וטרנספורמציה : 21
בדיקת טרנספורמנטים : 23
דיון בתוצאות:
5 הפקת DNA פלסמידי וקביעת גודל המחדר :
5 ניקוי, הכנת תוצרי ה PCR לשיבוט : 26
ליגציה וטרנספורמציה : 27
בדיקת טרנספורמנטים : 27
מסקנות : . 30 המלצות : 31
רשימת מקורות:. 32
נספחים : 33
רשימת איורים:
איור 1 : רצף נוקלאוטידים של הגן המקודד ל GFP. 6
איור 2 :הפלסמיד pGEM-T Easy המשמש כווקטור. 8
איור 3 :תיאור סכמטי של אזור ה- MCS בפלסמיד pGEM-T Easy. 8
איור 4 :הגברת מקטע  בתהליך  ה-PCR.. 12
איור 5 :דוגמא לקצוות שונים שיוצרים אנזימי רסטריקציה שונים. 13
איור 6 : מושבות חיידקים שקלטו פלסמיד ללא מחדר. 16
איור 7 : מושבות חיידקים שקלטו פלסמיד עם מחדר. 16
איור 8 : אלקטרופורזה. 17
איור 9 : תוצרי הרצה בג'ל עבור זיהוי קלון מתאים. 18
איור 10 : בדיקת תוצרי PCR, לפני ניקוי. 20 איור 11 : תוצר הרצה בג'ל עבור בניית הריאקציה יחס ווקטור – אינסרט. 21
איור 12 : תואצות הרצה בג'ל עבור סוגים שונים של מושבות. 24
איור 13 : צלחת ב UV המכילה מושבות של חיידקים כחולים, לבנים לא זוהרים וזוהרות בUV בירוק. 34
איור 14 : צלחת המכילה חיידקים טרנסגניים. 34